Plasmide CRISPR d'Activation (h) FANCC: sc-416477-ACT

Le gène humain **FANCC** code un composant central de la voie de réparation de l’ADN de l’anémie de Fanconi (FA), qui coordonne la réponse aux pontages interbrins de l’ADN et aux lésions associées à la réplication. FANCC participe à la formation et au fonctionnement du complexe central FA, en soutenant la monoubiquitinylation de **FANCD2/FANCI** et l’activation en aval de la recombinaison homologue ainsi que des mécanismes de stabilisation des fourches de réplication. Par ces activités, FANCC contribue à l’intégrité du génome, à la coordination des points de contrôle du cycle cellulaire et à la protection contre les stress génotoxiques endogènes et exogènes. L’altération ou le dysfonctionnement de FANCC est lié à la biologie de l’anémie de Fanconi et à des phénotypes plus larges d’instabilité génomique, pertinents pour l’étude des mécanismes d’insuffisance médullaire et des vulnérabilités de réparation de l’ADN associées au cancer.

FANCC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FANCC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FANCC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FANCC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FANCC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FANCC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FANCC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FANCC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FANCC dans les cellules tumorales présentant une expression de FANCC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.