Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM55D (h): sc-412343

Présentation

NXPE4 code la protéine humaine FAM55D, membre de la famille des protéines à domaine neurexophiline et PC-estérase, dont on prévoit qu’elle est sécrétée ou associée à la membrane et enrichie dans les contextes neuronaux. Bien que sa fonction moléculaire reste imparfaitement caractérisée, les caractéristiques de cette famille suggèrent des rôles dans les interactions protéiques extracellulaires et les processus de communication cellule–cellule, susceptibles d’influencer la connectivité neuronale et l’organisation synaptique. La variation au niveau des transcrits et les profils d’expression spécifiques des tissus ont été explorés dans des jeux de données génomiques, ce qui étaye la poursuite des recherches sur NXPE4 en neurobiologie et dans les réseaux régulateurs qui façonnent le développement et le fonctionnement du cerveau. Une expression altérée de NXPE4 a été rapportée dans des études d’association portant sur des cohortes pertinentes pour certaines maladies, ce qui motive des études mécanistiques afin de déterminer comment une perturbation affecte les phénotypes cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM55D (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NXPE4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NXPE4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NXPE4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM55D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NXPE4 pour l'étude de la signalisation de FAM55D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NXPE4 essentiels à la fonction de FAM55D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NXPE4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM55D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM55D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NXPE4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM55D plasmide HDR (h) et le FAM55D (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NXPE4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NXPE4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.