Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAM198B: sc-409269-ACT

FAM198B (famille avec similarité de séquence 198, membre B) code une protéine humaine encore mal caractérisée, dont les liens avec des processus associés aux membranes et la signalisation intracellulaire — influençant l’état cellulaire et l’organisation des tissus — se précisent progressivement. Des études transcriptomiques ont rapporté une régulation de FAM198B dépendante du contexte dans de multiples types cellulaires, suggérant des rôles potentiels dans des voies gouvernant la différenciation, l’adhérence et des programmes transcriptionnels sensibles au stress. Une expression altérée de FAM198B a été observée dans des jeux de données associés à des maladies, ce qui soutient son intérêt comme nœud moléculaire pour étudier la régulation génique en physiopathologie. Étant donné que les annotations mécanistiques restent limitées, la modulation contrôlée de FAM198B endogène constitue une approche accessible pour cartographier les réseaux de gènes en aval et les phénotypes.

FAM198B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAM198B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAM198B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAM198B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAM198B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAM198B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAM198B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAM198B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAM198B dans les cellules tumorales présentant une expression de FAM198B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.