Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAM171A2: sc-415352-ACT

FAM171A2 (famille présentant une similarité de séquence 171, membre A2) code une protéine humaine encore mal caractérisée, prédite comme associée à la membrane, et des données émergentes relient la famille FAM171 aux interactions cellule–cellule ainsi qu’à la régulation de la morphologie cellulaire. Des jeux de données transcriptomiques suggèrent une expression dépendante du contexte dans des lignées neurales et épithéliales, impliquant FAM171A2 dans des programmes liés à la différenciation et des états de signalisation spécifiques des tissus. Des profils d’expression altérés ont été rapportés dans certaines études portant sur le cancer et la neurobiologie, ce qui soutient l’exploration de FAM171A2 comme modulateur de la prolifération, de la migration ou de l’identité de lignée. Comme les annotations mécanistiques restent limitées, une perturbation contrôlée de FAM171A2 endogène est utile pour cartographier la connectivité des voies et définir les réponses transcriptionnelles en aval.

FAM171A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAM171A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAM171A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAM171A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAM171A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAM171A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAM171A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAM171A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAM171A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FAM171A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.