Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM118B (h): sc-413182

Présentation

FAM118B code une protéine humaine encore mal caractérisée, dont on prévoit qu’elle participe à l’homéostasie cellulaire fondamentale, et des données récentes relient les membres de la famille FAM118 à des processus associés à l’ARN ainsi qu’à l’organisation nucléaire. L’expression basale de FAM118B dans les différents tissus suggère un rôle dans le maintien de programmes essentiels d’expression génique, à l’interface avec la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et les réseaux de protéostase. Des profils d’expression altérés ont été rapportés dans des jeux de données multi-omiques sur le cancer et dans d’autres contextes pathologiques, ce qui appuie son utilisation comme régulateur candidat dans les études de biologie tumorale et de fitness cellulaire. Comme sa fonction moléculaire reste incomplètement définie, FAM118B se prête bien à une investigation guidée par des hypothèses, à l’aide de perturbations génétiques visant à cartographier les voies en aval et les partenaires d’interaction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM118B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FAM118B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FAM118B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FAM118B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM118B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FAM118B pour l'étude de la signalisation de FAM118B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FAM118B essentiels à la fonction de FAM118B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FAM118B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM118B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM118B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FAM118B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM118B plasmide HDR (h) et le FAM118B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FAM118B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FAM118B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.