FAM118B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413182

Übersicht

FAM118B kodiert ein bislang nur unzureichend charakterisiertes menschliches Protein, dem eine Beteiligung an grundlegender zellulärer Homöostase vorhergesagt wird. Zunehmende Hinweise verbinden Mitglieder der FAM118‑Familie mit RNA-assoziierten Prozessen und der Organisation des Zellkerns. Die basale Expression von FAM118B in verschiedenen Geweben spricht für eine Rolle bei der Aufrechterhaltung zentraler Genexpressionsprogramme, die mit Zellzyklusprogression, Stressantworten und Proteostase-Netzwerken verknüpft sind. Veränderte Expressionsmuster wurden in multi-omischen Krebsdatensätzen sowie in anderen Krankheitskontexten beschrieben, was FAM118B als potenziellen Regulator für Studien zur Tumorbiologie und Zellfitness nahelegt. Da seine molekulare Funktion weiterhin nicht vollständig definiert ist, eignet sich FAM118B gut für hypothesengetriebene Untersuchungen mittels genetischer Perturbation, um nachgeschaltete Signalwege und Interaktionspartner zu kartieren.

Das FAM118B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FAM118B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FAM118B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FAM118B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAM118B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FAM118B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAM118B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FAM118B-Exone abzielen, die für die FAM118B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FAM118B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAM118B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FAM118B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FAM118B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAM118B HDR-Plasmid (h) und FAM118B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FAM118B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FAM118B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.