Plasmide Double Nickase (h) ETEA: sc-403730-NIC

FAF2 code pour la protéine ETEA, résidente du réticulum endoplasmique (également appelée UBXD8), un adaptateur à domaine UBX qui relie des substrats ubiquitinés à l’ATPase p97/VCP afin de favoriser la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD). En coordination avec des ligases ubiquitine de la membrane du RE et la machinerie associée aux gouttelettes lipidiques, ETEA influence la protéostasie, les réponses au stress des protéines mal repliées et le métabolisme lipidique, notamment le renouvellement de régulateurs clés de l’homéostasie des acides gras et des stérols. Des altérations de l’activité de FAF2/ETEA ont été associées à une dérégulation de la signalisation du stress du RE et à un remodelage métabolique observés dans des contextes tels que l’adaptation des cellules cancéreuses et des troubles lipidiques hépatiques, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la tolérance au stress et la régulation des lipides membranaires.

ETEA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAF2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.