Plasmide Double Nickase (h) ETBR: sc-401804-NIC

EDNRB code le récepteur de type B de l’endothéline (ETBR), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie aux peptides d’endothéline afin de réguler les flux intracellulaires de calcium, la signalisation de la phospholipase C et, en aval, les voies associées à MAPK/ERK et à PI3K. L’activité d’ETBR contribue à la migration et à la différenciation des cellules de la crête neurale, au développement des mélanocytes et au contrôle du tonus vasculaire via des réseaux de signalisation dépendants de l’endothéline. En biologie humaine, un dysfonctionnement d’EDNRB est associé à des troubles du développement du système nerveux entérique, tels que la maladie de Hirschsprung, ainsi qu’à des phénotypes de pigmentation, reflétant son rôle dans la mise en place des programmes de développement et de motilité cellulaire. Une signalisation EDNRB altérée est également étudiée dans le contexte des interactions entre cellules tumorales et microenvironnement, ainsi que de la plasticité de lignée, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation des GPCR et des voies du développement.

ETBR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EDNRB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EDNRB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EDNRB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EDNRB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.