Particules Lentivirales d'Activation (h) Estrogen Receptor beta: sc-400213-LAC

L’ESR2 humain code le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme facteur de transcription en régulant des réseaux géniques impliqués dans la différenciation cellulaire, la prolifération, l’apoptose, l’inflammation et l’homéostasie métabolique. Après liaison à des œstrogènes ou à des ligands sélectifs, ERβ engage la signalisation canonique des récepteurs nucléaires via des éléments de réponse aux œstrogènes et par des interactions (crosstalk) avec les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB et TGF-β, afin de façonner des programmes transcriptionnels spécifiques au contexte. L’expression d’ESR2 et l’activité d’ERβ ont été impliquées dans la biologie hormono-dépendante au sein de tissus de l’appareil reproducteur, cardiovasculaires, immunitaires et du système nerveux central, et sont fréquemment étudiées pour leurs rôles en biologie tumorale, en régulation endocrinienne et dans les mécanismes des maladies inflammatoires. Une signalisation ESR2 dérégulée peut modifier une transcription dépendante de l’état de la chromatine, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les isoformes du récepteur, l’utilisation de co-régulateurs et le remodelage des voies de signalisation dans des modèles cellulaires associés aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales Estrogen Receptor beta (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ESR2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Estrogen Receptor beta (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ESR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Estrogen Receptor beta. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ESR2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.