Plasmide Double Nickase (h) ERp57: sc-401497-NIC

PDIA3 code ERp57, un membre de la famille des isomérases de disulfure des protéines qui agit dans le réticulum endoplasmique pour catalyser la formation et l’isomérisation des ponts disulfure lors du repliement des glycoprotéines. ERp57 coopère avec la calnexine et la calréticuline dans le contrôle qualité du RE, favorisant la maturation des protéines sécrétées et membranaires ainsi que leur intégration avec la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et les voies de dégradation associées au RE (ERAD). Au-delà du repliement protéique, ERp57 contribue à la présentation antigénique via le chargement des peptides sur le CMH de classe I et influence des processus de signalisation régulés par l’état rédox. Une dérégulation de la protéostasie et des fonctions immunitaires dépendantes de PDIA3/ERp57 a été associée à des phénotypes de stress cellulaire et est étudiée dans des contextes tels que la neurodégénérescence, le stress métabolique et la biologie des cellules cancéreuses.

ERp57 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDIA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDIA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDIA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDIA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.