Erg Lentiviral Activation Particles (m): sc-420226-LAC

Erg kodiert einen Transkriptionsfaktor der ETS-Familie, der an GGAA/T-Motive bindet und Genprogramme koordiniert, welche die Endothelbiologie, die Aufrechterhaltung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen sowie die linienspezifische Differenzierung steuern. In der Maus integriert Erg Signale aus Entwicklungs- und Gefäßsignalwegen, um über die transkriptionelle Kontrolle angiogener, entzündungsbezogener und mit Stammzell-Eigenschaften assoziierter Zielgene die Zellzyklusprogression, das Überleben und den Chromatinzustand zu regulieren. Eine fehlregulierte ERG-Aktivität wird mit veränderter Hämatopoese und aberrantem vaskulärem Remodeling in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Umprogrammierung transkriptioneller Netzwerke bei Leukämogenese und endothelialer Dysfunktion untersucht. Diese Funktionen machen Erg zu einem geeigneten Knotenpunkt, um genregulatorische Schaltkreise, Enhancer-Nutzung und Zellschicksalsentscheidungen in relevanten Mausmodellen und primären Zellsystemen zu analysieren.

Erg Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Erg-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Erg Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Erg-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Erg-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Erg-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.