EPX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402513

Descripción general

EPX (peroxidasa de eosinófilos) codifica una enzima granular que contiene hemo y se expresa predominantemente en los eosinófilos, donde cataliza reacciones oxidativas dependientes de haluros y tiocianato que contribuyen a la actividad antimicrobiana y a la modulación de los microambientes inflamatorios. Al generar oxidantes reactivos, EPX se integra en vías efectoras de la inmunidad innata, la señalización redox y mecanismos de remodelación de la matriz extracelular que influyen en el reclutamiento de leucocitos y en las respuestas de lesión tisular. Las alteraciones en la actividad de EPX y la desgranulación de eosinófilos se han asociado con inflamación eosinofílica en enfermedades de las vías respiratorias y gastrointestinales, así como con reacciones de hipersensibilidad. Por ello, EPX se utiliza ampliamente como un marcador molecular de activación de eosinófilos y como un nodo funcional para estudiar el daño impulsado por el estrés oxidativo y la regulación inmunitaria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EPX (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EPX en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EPX junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EPX tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EPX.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EPX para la investigación de la señalización de EPX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EPX críticos para la función de EPX
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EPX para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EPX CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EPX CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EPX. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EPX (h) y el plásmido HDR EPX (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EPX para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EPX definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.