Plasmide CRISPR/Cas9 KO EpoR (m): sc-420210

Présentation

Epor code le récepteur de l’érythropoïétine (EpoR), un récepteur de cytokines de type I essentiel à la survie, à la prolifération et à la différenciation des progéniteurs érythroïdes dans l’hématopoïèse murine. La dimérisation du récepteur induite par le ligand active JAK2 et la signalisation en aval via STAT5, avec un couplage supplémentaire aux voies PI3K–AKT et MAPK/ERK, qui régulent des programmes anti-apoptotiques et de contrôle du cycle cellulaire. L’activité d’EpoR module les réponses à la signalisation de l’érythropoïétine induite par l’hypoxie et s’intègre à des réseaux cytokiniques plus larges dans la moelle osseuse et la rate. Une signalisation dérégulée de la voie EPOR est largement utilisée comme modèle pour étudier les défauts d’érythropoïèse, les perturbations de la signalisation des récepteurs de cytokines et les mécanismes de l’érythropoïèse de stress, pertinents pour l’anémie et les phénotypes d’hyperprolifération érythroïde.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EpoR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Epor dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Epor, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Epor à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EpoR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Epor pour l'étude de la signalisation de EpoR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Epor essentiels à la fonction de EpoR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Epor pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EpoR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EpoR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Epor. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EpoR plasmide HDR (m) et le EpoR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Epor pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Epor définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.