EPHX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402095-ACT

EPHX2 codifica a epóxido-hidrolase solúvel (sEH), uma enzima bifuncional que converte epóxi-ácidos graxos bioativos, como os ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs), em dióis menos ativos, modulando o tônus de mediadores lipídicos em contextos vasculares, renais e imunológicos. Por meio desse papel no metabolismo do ácido araquidônico e de oxilipinas de forma mais ampla, o EPHX2 influencia redes de sinalização associadas à resolução da inflamação, à função endotelial, às respostas ao estresse oxidativo e à regulação da pressão arterial. Alterações na atividade da sEH e nos padrões de expressão de EPHX2 têm sido associadas a características cardiometabólicas, a vias relacionadas à hipertensão e a mecanismos de doenças inflamatórias, o que motiva estudos mecanísticos sobre o turnover de epóxidos lipídicos. Em modelos celulares, a modulação de EPHX2 é utilizada para investigar a comunicação cruzada entre sinalização lipídica, programas de citocinas e respostas transcricionais ativadas por estresse.

sEH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EPHX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

sEH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EPHX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EPHX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de sEH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EPHX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de sEH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via sEH em células tumorais com expressão de EPHX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.