Particules Lentivirales d'Activation (m) EphB6: sc-420202-LAC

Le gène murin *Ephb6* code EphB6, un membre atypique de la famille des récepteurs tyrosine kinases Eph, dont l’activité catalytique est altérée, et qui module la communication cellule–cellule dépendante des éphrines-B. Par ses interactions avec d’autres récepteurs Eph et des ligands éphrine, EphB6 contribue à une signalisation dépendante du contact qui influence le remodelage du cytosquelette, l’adhésion et la migration, avec des effets en aval sur des voies telles que la signalisation des GTPases de la famille Rho et la dynamique MAPK/ERK. *Ephb6* est étudié notamment dans des contextes comme l’activation des cellules immunitaires et l’organisation épithéliale, où une altération de la signalisation Eph/éphrine peut remodeler l’architecture tissulaire et les microenvironnements inflammatoires. Une dérégulation de la signalisation associée à EphB6 a été liée à des modifications du comportement des cellules tumorales et du potentiel métastatique dans des modèles expérimentaux, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques de phénotypes cellulaires associés à des maladies.

Les particules d'activation lentivirales EphB6 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ephb6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EphB6 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ephb6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EphB6. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ephb6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.