EphA10 Double Nickase Plasmid (m): sc-432976-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphA10 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphA10 Double-Nickase-Plasmid (m) und EphA10 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Epha10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphA10 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432976-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA10 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432976-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Epha10** kodiert **EphA10**, ein Mitglied der Eph-Rezeptor-Tyrosinkinase-Familie, das die Zell-Zell-Kommunikation über die Bindung von Ephrinen und bidirektionale Signalübertragung vermittelt. Die EphA10-abhängige Signalgebung ist mit Signalwegen verknüpft, die den Umbau des Zytoskeletts, Zelladhäsion und Migrationsverhalten steuern – Prozesse, die die Gewebemusterung und die Organisation neuronaler Schaltkreise prägen. Obwohl EphA10 häufig als atypischer Eph-Rezeptor mit veränderter Kinaseaktivität beschrieben wird, kann es die Rezeptorclusterbildung und nachgeschaltete Signalnetzwerke modulieren, die Differenzierung und Gewebehomöostase beeinflussen. Fehlregulierte Eph/Ephrin-Signalgebung wird breit mit abweichender Zellpositionierung und veränderter Wachstumskontrolle in Verbindung gebracht, was **Epha10** zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in Modellen der Entwicklung, Immunologie und Krebsbiologie macht.
EphA10 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Epha10-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Epha10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Epha10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Epha10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.