EphA1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420191-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EphA1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EphA1 Double Nickase Plasmid (m) e il EphA1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Epha1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EphA1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420191-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420191-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Epha1** codifica la tirosin-chinasi recettoriale **EphA1**, membro del sistema di segnalazione Eph/efrina che media la comunicazione dipendente dal contatto tra cellule adiacenti. L’attivazione di EphA1 regola l’aggregazione dei recettori e la fosforilazione su tirosina per controllare il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellulare e la migrazione direzionale, influenzando la formazione di confini e il patterning dei tessuti durante lo sviluppo. La segnalazione a valle interseca le GTPasi della famiglia Rho e vie associate a MAPK/ERK che modulano la motilità cellulare e le risposte di crescita. Un’attività di EphA1 deregolata è stata collegata ad alterazioni dell’organizzazione epiteliale e a fenotipi associati all’invasione, rendendo **Epha1** un locus utile per studiare meccanismi rilevanti per la biologia tumorale e le interazioni con il microambiente in modelli murini.
EphA1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Epha1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Epha1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Epha1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Epha1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.