Plasmide CRISPR d'Activation (h) Endothelin-2/EDN2/ET-2: sc-403871-ACT

EDN2 code l’endothéline‑2 (ET‑2), un puissant peptide vasoactif issu de la maturation d’un prépropeptide et agissant principalement via les récepteurs de l’endothéline (EDNRA/EDNRB) pour réguler la contraction du muscle lisse, la signalisation endothéliale et le contrôle paracrine de la perfusion tissulaire. La signalisation de l’ET‑2 mobilise des voies couplées aux protéines G qui modulent le calcium intracellulaire ainsi que les cascades MAPK/ERK et PLC/PKC, influençant la prolifération, la migration et la production de médiateurs inflammatoires. Au‑delà de la biologie vasculaire, EDN2 est impliqué dans la dynamique reproductive et folliculaire ovarienne, les programmes transcriptionnels dépendants de l’hypoxie et le remodelage stromal. Une activité dérégulée de l’axe des endothélines, notamment une expression altérée d’EDN2, a été associée à des processus fibrosants, à des atteintes pulmonaires et cardiovasculaires, ainsi qu’à la signalisation du microenvironnement tumoral pertinente en cancérologie.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EDN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EDN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EDN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Endothelin-2/EDN2/ET-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EDN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Endothelin-2/EDN2/ET-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Endothelin-2/EDN2/ET-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EDN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.