Enamelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420174

概要

Enamはエナメリンをコードしており、マウスにおける歯のエナメル質形成に必須の、分泌型の細胞外マトリックス糖タンパク質である。エナメリンは、ハイドロキシアパタイト結晶の核形成と成長を制御し、他のエナメル質形成関連タンパク質（アメロジェネシス関連タンパク質）と協調してエナメル基質の組み立てとプロセシングを調整することで、エナメル質の生体鉱物化に関与する。その働きは、エナメロブラスト（エナメル芽細胞）による基質沈着、プロテアーゼによるリモデリング、ならびにミネラル成熟といった過程を支え、これらの過程がエナメル質の厚みと構造的完全性を規定する。ENAM機能の破綻は、エナメル質低形成やアメロジェネシス・インペルフェクタ（形成不全）様の表現型と関連しており、鉱質化組織の発生や歯の病態機構を研究するうえで有用な標的となる。

Enamelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEnam遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Enam内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Enamのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Enamelinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Enamelinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Enam欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Enamelinの機能に不可欠なEnamエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Enamゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Enamelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEnamelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Enam遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Enamelin HDRプラスミド（m）および Enamelin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEnamホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEnam標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。