Emx2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403570-ACT

EMX2 codifica o fator de transcrição homeobox Emx2, um regulador nuclear que padroniza tecidos embrionários e orienta a identidade regional no córtex cerebral em desenvolvimento. Em células humanas, o EMX2 contribui para redes transcricionais que controlam a proliferação de progenitores, a diferenciação neuronal e a morfogênese tecidual, integrando-se a programas mais amplos de sinalização do desenvolvimento, como Wnt/β-catenina, e a vias relacionadas de regulação cromatínica. Alterações na expressão de EMX2 ou perturbações na sua regulação têm sido associadas a anomalias do neurodesenvolvimento e foram relatadas como desreguladas em múltiplos contextos tumorais nos quais o controle do destino celular e o estado de diferenciação estão comprometidos. Essas propriedades fazem do EMX2 um nó útil para estudar o controle transcricional da especificação de linhagem, a plasticidade celular e circuitos regulatórios gênicos associados a doenças.

Emx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EMX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Emx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EMX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EMX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Emx2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EMX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Emx2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Emx2 em células tumorais com expressão de EMX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.