Plasmide Double Nickase (h) EMR1: sc-400698-NIC

ADGRE1 code pour EMR1, un récepteur d’adhésion couplé aux protéines G principalement exprimé par les cellules de la lignée myéloïde, où il favorise les interactions cellule–cellule et la surveillance immunitaire au sein des microenvironnements tissulaires. Membre de la famille EGF-TM7, EMR1 contribue à l’adhérence des leucocytes et à des processus de signalisation liés au remodelage du cytosquelette et à la migration cellulaire régulée. L’expression d’EMR1 est largement utilisée pour annoter des états associés aux macrophages et aux éosinophiles, ce qui la rend pertinente pour les études de la régulation de l’inflammation et de la différenciation des cellules immunitaires. Les profils d’activation myéloïde dysrégulée et les schémas d’infiltration tissulaire corrélés aux populations EMR1-positives sont fréquemment examinés dans les contextes d’inflammation chronique et dans les paysages immunitaires associés aux tumeurs.

EMR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADGRE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADGRE1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADGRE1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADGRE1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.