Plasmide Double Nickase (h) Elf-5: sc-400931-NIC

ELF5 code le facteur de transcription Elf-5 de la famille ETS, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence et régulant des programmes d’expression génique restreints à certaines lignées dans les tissus épithéliaux. Elf-5 intègre des signaux issus de voies développementales et hormonales afin de contrôler la différenciation, la progression du cycle cellulaire et le maintien de l’identité épithéliale, en influençant des réseaux transcriptionnels impliqués dans l’adhérence et la morphogenèse tissulaire. Une expression dérégulée de l’ELF5 ou des circuits de régulation altérés ont été associés à des modifications de la plasticité épithéliale et à des phénotypes invasifs dans de nombreux cancers, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le contrôle transcriptionnel dépendant du contexte. ELF5 est également étudié dans des contextes immunitaires et inflammatoires, où les facteurs ETS coordonnent des programmes géniques liés aux transitions d’état cellulaire et à la réponse aux signaux du microenvironnement.

Elf-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELF5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.