Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4H (h): sc-411056

Présentation

EIF4H code le facteur humain d’initiation de la traduction eIF4H, une protéine accessoire qui coopère avec eIF4A pour stimuler l’activité hélicase de l’ARN dépendante de l’ATP et favoriser le balayage (« scanning ») à travers des 5′ UTR structurées lors de l’initiation de la traduction dépendante de la coiffe. En modulant le recrutement des ribosomes et l’efficacité de traduction spécifique à chaque ARNm, eIF4H contribue à façonner la production du protéome en réponse aux signaux de croissance et au stress cellulaire, reliant la fonction d’EIF4H à la régulation de la prolifération, de la différenciation et des programmes d’adaptation au stress. La dérégulation de composants de l’initiation de la traduction, dont eIF4H, a été associée à une expression altérée de voies oncogéniques et de survie, et fait fréquemment l’objet d’études dans des domaines tels que la biologie des tumeurs, la neurobiologie et le contrôle de la traduction virus–hôte. La perturbation d’EIF4H constitue donc un point d’entrée utile pour disséquer les mécanismes de contrôle traductionnel et leurs conséquences en aval sur la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4H (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EIF4H dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EIF4H, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EIF4H à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF4H.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EIF4H pour l'étude de la signalisation de eIF4H, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EIF4H essentiels à la fonction de eIF4H
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EIF4H pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF4H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le eIF4H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EIF4H. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF4H plasmide HDR (h) et le eIF4H (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EIF4H pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EIF4H définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.