Particules Lentivirales d'Activation (h) eIF4B: sc-402494-LAC

EIF4B code le facteur humain d’initiation de la traduction eIF4B, un régulateur de la traduction des ARNm dépendante de la coiffe qui favorise le recrutement du complexe de pré‑initiation 43S et renforce l’activité hélicase des ARN au sein de l’axe eIF4F, facilitant le balayage des 5′ UTR structurées. En modulant l’efficacité de la traduction, eIF4B intègre les signaux provenant des voies de croissance et de stress, notamment PI3K–AKT–mTOR et MAPK, afin de façonner la production protéique lors de la prolifération et de l’adaptation cellulaire. Une activité d’eIF4B dérégulée a été associée à des programmes altérés de contrôle traductionnel impliqués dans la signalisation oncogénique et des phénotypes de survie, et eIF4B est fréquemment étudié comme un nœud reliant des réseaux de kinases en amont à la traduction sélective d’ARNm. Ces caractéristiques font d’EIF4B une cible utile pour disséquer la régulation de la traduction, le couplage signalisation‑traduction et la protéostasie dépendante des voies dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales eIF4B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EIF4B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales eIF4B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EIF4B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de eIF4B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EIF4B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.