Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF3η (h): sc-400817

Présentation

EIF3B code une sous-unité centrale du complexe eucaryote d’initiation de la traduction 3 (eIF3), eIF3η, qui coordonne le recrutement de la sous-unité ribosomique 40S et l’assemblage du complexe de préinitiation lors de la traduction dépendante de la coiffe. Par ses interactions avec d’autres facteurs d’initiation et avec l’ARNm, eIF3η contribue à la sélection du codon d’initiation et contrôle l’efficacité de traduction de transcrits impliqués dans la croissance, le métabolisme et l’adaptation au stress. La fonction d’EIF3B recoupe des voies qui régulent la protéostase et la progression du cycle cellulaire, et une initiation de la traduction dérégulée est fréquemment associée à des signalisations oncogéniques et à une altération de la fitness cellulaire. En tant que nœud central du contrôle traductionnel, EIF3B est couramment étudié dans des contextes de prolifération, de réponses au stress et de modifications des programmes de synthèse protéique associées à la transformation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF3η (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EIF3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EIF3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EIF3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF3η.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EIF3B pour l'étude de la signalisation de eIF3η, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EIF3B essentiels à la fonction de eIF3η
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EIF3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF3η plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le eIF3η plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EIF3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF3η plasmide HDR (h) et le eIF3η (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EIF3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EIF3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.