Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2Bδ (m): sc-420143

Présentation

Eif2b4 code la sous-unité δ d’eIF2B, le facteur d’échange de nucléotides guanyliques qui recharge eIF2‑GDP en eIF2‑GTP et contrôle ainsi l’initiation de la traduction. En modulant la disponibilité du complexe ternaire, eIF2B intègre les signaux liés aux nutriments et au stress au sein de la réponse intégrée au stress (ISR) et s’articule avec la régulation de la synthèse protéique dépendante de la phosphorylation d’eIF2α. L’activité d’eIF2B influence la protéostasie, la croissance cellulaire et des programmes transcriptionnels adaptatifs associés au stress du réticulum endoplasmique et au stress oxydatif. Un dysfonctionnement des sous-unités d’eIF2B est associé à des voies impliquées dans la leucodystrophie hypomyélinisante, ce qui fait d’Eif2b4 un nœud pertinent pour étudier le contrôle de la traduction sensible au stress dans les systèmes neuronaux et gliaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2Bδ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif2b4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif2b4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif2b4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF2Bδ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif2b4 pour l'étude de la signalisation de eIF2Bδ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eif2b4 essentiels à la fonction de eIF2Bδ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif2b4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF2Bδ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le eIF2Bδ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif2b4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF2Bδ plasmide HDR (m) et le eIF2Bδ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif2b4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif2b4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.