Plasmide CRISPR d'Activation (h) eIF1B: sc-403809-ACT

EIF1B code le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 1B humain (eIF1B), un composant conservé de la machinerie d’initiation de la traduction, qui favorise la sélection du codon d’initiation et l’assemblage efficace des complexes d’initiation. En modulant la capacité globale de synthèse protéique, eIF1B s’inscrit au carrefour de programmes cellulaires qui dépendent d’un contrôle traductionnel précis, notamment la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et l’adaptation aux signaux des nutriments et des facteurs de croissance. Une initiation de la traduction dérégulée est une caractéristique récurrente des états prolifératifs et d’adaptation au stress, ce qui rend EIF1B pertinent pour des études mécanistiques de la régulation de l’expression génique dans des contextes associés à des maladies. La perturbation d’EIF1B peut donc être utilisée pour explorer comment une fidélité d’initiation altérée et une production traductionnelle modifiée remodèlent les voies en aval et les phénotypes.

eIF1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EIF1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eIF1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EIF1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EIF1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eIF1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EIF1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eIF1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eIF1B dans les cellules tumorales présentant une expression de EIF1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.