EID-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425516-ACT

O EID-1 de camundongo (Eid1) codifica um regulador de diferenciação que interage com EP300/CBP e atua como modulador transcricional na interface entre a remodelação da cromatina e o controle do ciclo celular. O EID-1 tem sido associado à regulação da transcrição dependente de RB/E2F e de programas de diferenciação, influenciando a capacidade proliferativa e o comprometimento de linhagem em tecidos em desenvolvimento e adultos. Por meio de interações com co-reguladores transcricionais, pode moldar redes de expressão gênica envolvidas em parada de crescimento, respostas ao estresse e homeostase tecidual. O controle transcricional associado ao EID1, quando desregulado, é relevante para estudos de proliferação e diferenciação aberrantes, inclusive em contextos que modelam sinalização oncogênica e fenótipos do desenvolvimento.

EID-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Eid1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EID-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Eid1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Eid1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EID-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Eid1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EID-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EID-1 em células tumorais com expressão de Eid1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.