Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO EFP (h): sc-402678
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- EFP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique EFP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EFP Antibody (E-4): sc-166926
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO EFP (h) | sc-402678 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
TRIM25 code pour la ligase E3 de l’ubiquitine EFP, une protéine de la famille TRIM qui catalyse des événements d’ubiquitination contrôlant la signalisation immunitaire innée et le métabolisme de l’ARN. EFP favorise les réponses antivirales en ubiquitinant et en activant RIG-I, facilitant la signalisation en aval des interférons de type I via MAVS, TBK1 et IRF3/7, et peut moduler les réponses inflammatoires associées à NF-κB. Au-delà de la défense de l’hôte, TRIM25 participe à la régulation post-transcriptionnelle via des interactions avec des protéines liant l’ARN et influence des programmes du cycle cellulaire et de réponse au stress. Une activité dérégulée de TRIM25 a été associée à une modulation du tonus interféron, à la sensibilité aux virus et à des rôles dépendants du contexte en biologie tumorale et en signalisation endocrine, ce qui en fait un nœud pertinent pour la recherche sur l’inflammation et le cancer.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EFP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM25 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM25, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM25 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EFP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM25 pour l'étude de la signalisation de EFP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM25 essentiels à la fonction de EFP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM25 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le EFP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EFP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM25. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le EFP plasmide HDR (h) et le EFP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM25 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM25 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.