Plasmide Double Nickase (h) EEA1: sc-400234-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EEA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EEA1 Double Nickase (h) et le plasmide EEA1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EEA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EEA1 Antibody (G-4): sc-137130
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EEA1 | sc-400234-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EEA1 | sc-400234-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEA1 code l’antigène 1 des endosomes précoces (Early Endosome Antigen 1), un effecteur de Rab5 qui agit comme facteur d’arrimage (tethering) indispensable à l’amarrage des endosomes précoces et à leur fusion homotypique. Via son domaine FYVE, EEA1 se lie au phosphatidylinositol 3‑phosphate et coordonne l’identité des membranes endosomales avec les événements de trafic vésiculaire, influençant l’endocytose médiée par les récepteurs et le tri des cargos. La dynamique endosomale dépendante d’EEA1 recoupe la signalisation PI3K, l’organisation du cytosquelette et la maturation des compartiments endocytiques qui régulent le renouvellement des récepteurs aux facteurs de croissance. Un trafic endosomal dérégulé et des perturbations de l’axe Rab5–EEA1 ont été associés à une altération de l’homéostasie de la signalisation dans le cancer, ainsi qu’à des défauts endolysosomaux impliqués dans des contextes de recherche sur les maladies neurodégénératives et infectieuses.
EEA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EEA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EEA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EEA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EEA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.