Plasmide CRISPR/Cas9 KO ECHS1 (h): sc-406053

Présentation

ECHS1 code l’énoyl‑CoA hydratase 1 à chaîne courte, une enzyme de la matrice mitochondriale de la spirale de β‑oxydation des acides gras qui catalyse l’hydratation des intermédiaires trans‑2‑énoyl‑CoA à chaîne courte. Par son rôle dans le métabolisme énergétique, ECHS1 soutient la production mitochondriale d’acétyl‑CoA et s’inscrit à l’interface de voies qui maintiennent l’équilibre rédox et la phosphorylation oxydative en situation de stress nutritionnel. Une altération de la fonction d’ECHS1 perturbe l’utilisation des substrats mitochondriaux et est associée à des erreurs innées du métabolisme caractérisées par une acidose lactique et des phénotypes neurodégénératifs. Dans les modèles cellulaires, ECHS1 est fréquemment étudié pour son impact sur la bioénergétique mitochondriale, les flux métaboliques et la signalisation induite par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ECHS1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ECHS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ECHS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ECHS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ECHS1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ECHS1 pour l'étude de la signalisation de ECHS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ECHS1 essentiels à la fonction de ECHS1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ECHS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ECHS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ECHS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ECHS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ECHS1 plasmide HDR (h) et le ECHS1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ECHS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ECHS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.