Ebi2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405397-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ebi2O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Ebi2 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Ebi2 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GPR183. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ebi2 Anticorpo (G-12): sc-514342
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ebi2 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ebi2 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR183 codifica o EBI2 (também conhecido como GPR183), um receptor acoplado à proteína G que detecta oxisteróis como o 7α,25-di-hidroxicolesterol para orientar o posicionamento de células imunes. A sinalização de EBI2 coordena respostas quimiotáticas e contribui para a organização do tecido linfoide ao moldar a localização de células B e células dendríticas dentro dos folículos e das regiões interfoliculares. Por meio de vias mediadas por GPCR, incluindo sinalização dependente de Gαi, influencia a migração, os estados de ativação e as interações induzidas por antígeno que são centrais para a imunidade humoral. A atividade desregulada de GPR183 tem sido implicada em contextos inflamatórios e autoimunes e tem sido investigada na remodelação imune relacionada a infecções, tornando-o um nó útil para estudar o tráfego de células imunes e a biologia dos oxisteróis.
Ebi2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GPR183 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GPR183. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GPR183. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GPR183 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.