Plasmide CRISPR d'Activation (m) Dysbindin: sc-430148-ACT

Le gène murin **Dtnbp1** code la dysbindine, une protéine cytosolique et endosomale qui constitue un composant central du complexe **BLOC-1**, coordonnant le trafic endosome‑lysosome, le tri des cargos et la sécrétion régulée. La dysbindine contribue à la biogenèse des vésicules synaptiques et à la libération des neurotransmetteurs en influençant les voies vésiculaires et la dynamique membranaire associée à l’actine, reliant ainsi le transport intracellulaire au fonctionnement des circuits neuronaux. Au-delà de ses rôles dans le tissu nerveux, le trafic dépendant de **Dtnbp1** affecte les organites liés aux lysosomes et le renouvellement des récepteurs, modulant les sorties de signalisation cellulaire. Des altérations de l’expression ou de la fonction de **DTNBP1** ont été associées à la biologie des maladies neuropsychiatriques et au dysfonctionnement synaptique, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de voies pertinentes pour le cerveau.

Dysbindin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Dtnbp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dysbindin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Dtnbp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Dtnbp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dysbindin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Dtnbp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dysbindin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dysbindin dans les cellules tumorales présentant une expression de Dtnbp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.