Plasmide CRISPR d'Activation (h) DUOX2: sc-403534-ACT

DUOX2 code la dual oxydase 2, un membre de la famille des oxydases NADPH qui génère du peroxyde d’hydrogène à la membrane plasmique et au sein des voies sécrétoires, soutenant la signalisation rédox épithéliale et le traitement oxydatif des protéines. L’activité de DUOX2 contribue à la défense innée des muqueuses et à la signalisation inflammatoire en fournissant du H2O2 pour des réactions antimicrobiennes médiées par des peroxydases, et en modulant des voies sensibles aux ROS telles que NF-κB et les réseaux de cytokines. Dans la thyroïde, le H2O2 dérivé de DUOX2 est requis pour l’organification de l’iodure et l’iodation de la thyroglobuline, reliant ainsi cette enzyme à la biosynthèse hormonale. Une expression ou une fonction altérée de DUOX2 a été associée à une dyshormonogenèse thyroïdienne ainsi qu’à des phénotypes inflammatoires épithéliaux pertinents pour des modèles de maladies gastro-intestinales et des voies aériennes.

DUOX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DUOX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DUOX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DUOX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DUOX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DUOX2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DUOX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DUOX2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DUOX2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DUOX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.