Plasmide CRISPR d'Activation (h) DRAK2: sc-404787-ACT

STK17B code pour DRAK2 (DAPK-related apoptosis-inducing kinase 2), une kinase sérine/thréonine qui module les seuils d’activation des lymphocytes et intègre la signalisation en aval du récepteur des cellules T (TCR). DRAK2 a été associée à la régulation de l’apoptose, aux réponses au stress mitochondrial et au contrôle, via phosphorylation, de programmes transcriptionnels qui façonnent la survie et la fonction des cellules immunitaires. Par ces rôles, STK17B est fréquemment étudié dans les voies impliquées dans la tolérance immunitaire, la signalisation inflammatoire et l’adaptation au stress cellulaire. Une activité dérégulée de DRAK2 et des profils d’expression de STK17B ont été associés à des mécanismes de maladies immuno-médiées ainsi qu’à des variations dépendantes du contexte de la survie cellulaire observées dans la recherche sur le cancer et l’inflammation.

DRAK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STK17B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DRAK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STK17B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STK17B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DRAK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STK17B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DRAK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DRAK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de STK17B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.