DOCK 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-430116-ACT-2

O gene Dock2 de camundongo codifica a DOCK2, um fator de troca de nucleotídeos de guanina restrito ao compartimento hematopoético que ativa as GTPases Rac para controlar a remodelação do citoesqueleto de actina e a migração direcional em linfócitos, neutrófilos e outras células imunes. A DOCK2 atua a jusante de receptores de quimiocinas e da sinalização do receptor de antígeno, coordenando a adesão dependente de integrinas, a formação da sinapse imunológica e o tráfego através de tecidos linfoides por meio de vias que conectam a sinalização de PI3K à regulação das GTPases da família Rho. A disrupção genética e funcional de DOCK2 está associada a respostas imunes inata e adaptativa prejudicadas e tem sido implicada em fenótipos inflamatórios e semelhantes a autoimunidade, maior suscetibilidade a infecções e vigilância imune antitumoral alterada em sistemas experimentais. A edição do gene Dock2 em camundongo sustenta estudos mecanísticos de motilidade de leucócitos, quimiotaxia e reprogramação de redes de sinalização, permitindo a dissecação de mecanismos intrínsecos às células imunes em modelos de pesquisa de inflamação, interações hospedeiro–patógeno e imuno-oncologia.

DOCK 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dock2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DOCK 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dock2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dock2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DOCK 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dock2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DOCK 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DOCK 2 em células tumorais com expressão de Dock2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.