Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dnmt3L (m): sc-424871

Présentation

Dnmt3l code DNMT3L, un cofacteur catalytiquement inactif qui stimule les méthyltransférases d’ADN de novo DNMT3A et DNMT3B afin d’établir et de maintenir, au cours du développement, les profils de méthylation de l’ADN. Chez la souris, DNMT3L joue un rôle majeur dans la programmation épigénétique de la lignée germinale, où il favorise la méthylation des rétrotransposons et des régions de contrôle de l’empreinte, contribuant ainsi à la stabilité du génome et à la régulation de l’expression génique spécifique de l’origine parentale. Par ces fonctions, DNMT3L s’inscrit dans des voies de régulation épigénétique qui coordonnent l’état de la chromatine, le silençage transcriptionnel et la reprogrammation associée à la méiose. La dérégulation des processus de méthylation associés à DNMT3L est liée à des défauts d’empreinte, à une altération de la répression des transposons et, plus largement, à une instabilité de l’épigénome susceptible d’influencer des phénotypes développementaux et des états épigénétiques impliqués dans la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dnmt3L (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dnmt3l dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dnmt3l, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dnmt3l à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dnmt3L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dnmt3l pour l'étude de la signalisation de Dnmt3L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dnmt3l essentiels à la fonction de Dnmt3L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dnmt3l pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dnmt3L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Dnmt3L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dnmt3l. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dnmt3L plasmide HDR (m) et le Dnmt3L (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dnmt3l pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dnmt3l définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.