Plasmide Double Nickase (h) DNase II: sc-405046-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DNase II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNase II Double Nickase (h) et le plasmide DNase II Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DNASE2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DNase II | sc-405046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DNase II | sc-405046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ADNase II humaine est codée par le gène **DNASE2**. Il s’agit d’une endonucléase acide principalement localisée dans les lysosomes, qui catalyse la dégradation de l’ADN au sein des phagolysosomes et des autolysosomes. Cette activité favorise l’élimination des acides nucléiques issus de cellules apoptotiques ainsi que de l’ADN génomique provenant de matériel internalisé, contribuant au maintien de l’homéostasie des acides nucléiques lors de la phagocytose et de l’autophagie. En limitant la persistance d’ADN intracellulaire, l’ADNase II module les voies de détection de l’immunité innée liées à la reconnaissance des acides nucléiques et à la signalisation inflammatoire en aval. Un dysfonctionnement de **DNASE2** a été associé à une accumulation anormale d’ADN et à des phénotypes d’activation immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’inflammation, de l’auto-immunité et de la biologie des macrophages.
DNase II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNASE2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNASE2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNASE2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNASE2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.