Plasmide Double Nickase (h) DNase I: sc-402467-NIC

Le gène humain **DNASE1** code la DNase I, une endonucléase sécrétée qui clive l’ADN extracellulaire et l’ADN associé à la chromatine, contribuant à l’élimination des acides nucléiques et à la régulation des signaux inflammatoires déclenchés par l’ADN du soi. L’activité de la DNase I influence des processus liés à la fragmentation de l’ADN associée à l’apoptose, au renouvellement des pièges extracellulaires des neutrophiles (NET) et à la prévention d’une activation aberrante de l’immunité innée via les voies de détection de l’ADN. Une expression ou une activité altérée de **DNASE1** a été associée à une clairance insuffisante de l’ADN circulant et à une dérégulation immunitaire, des contextes fréquemment étudiés dans des modèles d’auto-immunité et de lésions tissulaires. En cancérologie et en biologie du stroma, le renouvellement de l’ADN médié par la DNase I est également étudié pour ses effets sur le microenvironnement tumoral et la signalisation des acides nucléiques extracellulaires.

DNase I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNASE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNASE1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNASE1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNASE1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.