DNA pol ζCRISPR激活质粒(h): sc-402579-ACT

REV3L 编码 DNA 聚合酶 ζ（pol ζ）的催化亚基。pol ζ 是一种特化的跨损伤合成（translesion synthesis, TLS）聚合酶，能够从与 DNA 损伤位点相对插入的核苷酸处继续延伸，从而在基因毒性应激下支持复制叉前进。在 REV7（MAD2L2）以及停滞复制叉处的泛素信号协同作用下，pol ζ 在 DNA 损伤耐受通路中发挥功能，并与复制应激反应和复制后修复相衔接。由于 pol ζ 天生易出错，REV3L 的活性会影响突变负荷和基因组稳定性，使其调控与致癌过程以及模型系统中对 DNA 损伤暴露的耐受/抗性等现象相关联。REV3L 功能的改变还会通过调节“损伤跨越”与“复制叉崩溃”的结局，影响细胞周期进程与检查点信号传导。

DNA pol ζ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性REV3L的表达。

DNA pol ζ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的REV3L基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于REV3L转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性DNA pol ζ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的REV3L位点，并能够研究内源性位点上依赖于DNA pol ζ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在REV3L表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DNA pol ζ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。