DNA pol ε B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418231

Visão geral

POLE2 codifica a subunidade B da DNA polimerase épsilon, um componente acessório do holoenzima Pol ε que sustenta a síntese de DNA de alta fidelidade durante a fase S e contribui para a replicação da fita líder. Por meio do acoplamento ao replissoma, POLE2 ajuda a coordenar o alongamento processivo do DNA, a estabilidade da forquilha de replicação e a tolerância a danos no DNA, conectando a replicação do DNA às vias de sinalização de checkpoints e de manutenção do genoma. Alterações na função da Pol ε e o estresse replicativo estão associados a um aumento da carga mutacional e à instabilidade cromossômica, tornando POLE2 um alvo útil para estudar mecanismos que moldam a integridade do genoma em células humanas em proliferação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DNA pol ε B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POLE2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POLE2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POLE2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DNA pol ε B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POLE2 para a investigação da sinalização de DNA pol ε B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POLE2 críticos para a função DNA pol ε B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POLE2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DNA pol ε B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DNA pol ε B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POLE2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DNA pol ε B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DNA pol ε B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POLE2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POLE2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.