Plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol ε B (h): sc-418231

Présentation

POLE2 code la sous-unité B de l’ADN polymérase epsilon, un composant accessoire de l’holoenzyme Pol ε qui soutient une synthèse de l’ADN à haute fidélité durant la phase S et contribue à la réplication du brin directeur. En s’associant au réplisome, POLE2 aide à coordonner l’élongation processive de l’ADN, la stabilité de la fourche de réplication et la tolérance aux dommages de l’ADN, reliant la réplication de l’ADN aux voies de signalisation des points de contrôle et de maintien du génome. Des altérations de la fonction de Pol ε et le stress réplicatif sont associés à une augmentation de la charge mutationnelle et à l’instabilité chromosomique, ce qui fait de POLE2 une cible utile pour étudier les mécanismes qui façonnent l’intégrité du génome dans les cellules humaines en prolifération.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol ε B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLE2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLE2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLE2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DNA pol ε B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLE2 pour l'étude de la signalisation de DNA pol ε B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLE2 essentiels à la fonction de DNA pol ε B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLE2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DNA pol ε B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DNA pol ε B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLE2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DNA pol ε B plasmide HDR (h) et le DNA pol ε B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLE2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLE2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.