Plasmide Double Nickase (h) DMPK: sc-402727-NIC

DMPK (dystrophia myotonica-protein kinase) code une kinase sérine/thréonine qui se localise dans des compartiments cytoplasmiques et associés à la membrane, et contribue à la régulation du cytosquelette d’actine, de l’adhérence cellulaire et de l’organisation myofibrillaire. La signalisation de DMPK s’interface avec des voies dépendantes des GTPases de la famille Rho et influence l’excitabilité cellulaire ainsi que l’intégrité structurelle dans le muscle et d’autres tissus. Des altérations de la biologie de DMPK sont étroitement liées à la dystrophie myotonique de type 1, dans laquelle l’expansion des répétitions CTG au locus DMPK entraîne une dérégulation de l’épissage alternatif médiée par l’ARN, ainsi que des défauts en aval de la fonction musculaire, cardiaque et neuronale. La modulation expérimentale de DMPK est donc utile pour disséquer la signalisation dépendante des kinases et les mécanismes liés aux répétitions qui affectent l’architecture cellulaire et le traitement de l’ARN.

DMPK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DMPK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DMPK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DMPK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DMPK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.