Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dmp1: sc-402941-ACT

Le gène humain **DMTF1** code le facteur de transcription **Dmp1**, qui se lie à la cycline D et agit comme régulateur de la progression du cycle cellulaire et de la différenciation, associé à des fonctions de suppresseur de tumeur. Dmp1 intègre les signaux mitogènes au contrôle transcriptionnel des voies de point de contrôle, notamment via l’activation de l’axe **ARF–MDM2–TP53** et la modulation de programmes dépendants de **RB/E2F**. En influençant la sénescence, l’apoptose et la limitation de la prolifération, **DMTF1** contribue au maintien de la stabilité génomique en réponse aux signaux oncogéniques. Des altérations de l’expression ou de la fonction de **DMTF1** ont été associées à une dérégulation du contrôle de la croissance dans plusieurs contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les réponses au stress et les décisions de destinée cellulaire.

Dmp1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DMTF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dmp1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DMTF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DMTF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dmp1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DMTF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dmp1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dmp1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DMTF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.