Plasmide Double Nickase (m) Dkk-1: sc-420004-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Dkk-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Dkk-1 Double Nickase (m) et le plasmide Dkk-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dkk1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Dkk-1 Antibody (B-7): sc-374574
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Dkk-1 | sc-420004-NIC | 20 µg | $410.00 |
Dkk1 code Dickkopf-1 (Dkk-1), un antagoniste sécrété de la signalisation canonique Wnt/β-caténine qui se lie aux corécepteurs LRP5/6 et module l’activation de la voie dépendante de Frizzled. En ajustant les programmes transcriptionnels induits par Wnt, Dkk-1 influence les décisions de destin cellulaire, la prolifération, la différenciation et l’organisation des tissus au cours du développement et de l’homéostasie adulte. Dans des modèles murins, une activité altérée de Dkk1 a été associée à une ostéogenèse et un remodelage osseux dérégulés, à une régénération tissulaire compromise et à des modifications des réseaux de signalisation associés aux tumeurs via des effets sur l’équilibre de la voie Wnt. Son mode d’action extracellulaire fait également de Dkk-1 un nœud utile pour étudier la dynamique ligand–récepteur et les interactions entre voies de signalisation dans des systèmes axés sur les cellules souches et le microenvironnement.
Dkk-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dkk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dkk1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dkk1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dkk1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.