Plasmide Double Nickase (m) DIO3: sc-430733-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DIO3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DIO3 Double Nickase (m) et le plasmide DIO3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dio3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DIO3 | sc-430733-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Dio3* code la déiodinase de type 3 des iodothyronines (DIO3), une sélénoprotéine associée au réticulum endoplasmique et à la membrane plasmique, qui inactive les hormones thyroïdiennes en convertissant la T4 en T3 inverse (rT3) et la T3 en T2, limitant ainsi la signalisation locale des hormones thyroïdiennes. En modulant la disponibilité intracellulaire de T3, DIO3 influence des programmes transcriptionnels dépendants des récepteurs des hormones thyroïdiennes, qui régulent la prolifération, la différenciation, le métabolisme et la chronologie du développement. *Dio3* est un gène soumis à empreinte génomique au sein du locus *Dlk1–Dio3* et joue un rôle majeur dans la mise en place des tissus fœtaux et dans les processus de neurodéveloppement, où un contrôle strict de l’action des hormones thyroïdiennes est nécessaire. Une activité DIO3 dérégulée ou une altération de l’empreinte à ce locus a été associée à des perturbations de l’homéostasie endocrinienne et a été étudiée dans des contextes incluant des anomalies du développement et la biologie tumorale, où la signalisation des hormones thyroïdiennes influence l’état cellulaire.
DIO3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dio3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dio3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dio3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dio3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.