DIO3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403729-ACT

DIO3 codifica a desiodase de iodotironinas tipo III (DIO3), uma selenoenzima integral de membrana que inativa hormônios tireoidianos ao converter T4 em T3 reverso e T3 em T2, limitando assim a sinalização local de hormônio tireoidiano. Ao moldar a disponibilidade hormonal de modo específico por tecido, a DIO3 influencia programas transcricionais regulados por receptores de hormônio tireoidiano e contribui para a temporização do desenvolvimento, a homeostase metabólica e a diferenciação celular. A expressão de DIO3 é regulada em contextos como imprinting genômico e sinalização associada à hipóxia, e sua desregulação tem sido relacionada a alterações nos pontos de ajuste endócrinos e no controle do crescimento. Em câncer e em distúrbios do desenvolvimento, a atividade aberrante de DIO3 é frequentemente estudada como um mecanismo de modificação de redes de expressão gênica dependentes de hormônio tireoidiano no microambiente tumoral ou durante a organogênese.

DIO3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DIO3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DIO3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DIO3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DIO3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DIO3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DIO3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DIO3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DIO3 em células tumorais com expressão de DIO3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.