Plasmide Double Nickase (h) DIO1: sc-405162-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DIO1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DIO1 Double Nickase (h) et le plasmide DIO1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DIO1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DIO1 Antibody (B-7): sc-515198
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DIO1 | sc-405162-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DIO1 | sc-405162-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DIO1 code la déiodinase de type I des iodothyronines, une sélénoenzyme qui catalyse la déiodination des hormones thyroïdiennes sur l’anneau externe et l’anneau interne, convertissant la thyroxine (T4) en triiodothyronine (T3) bioactive et régulant la disponibilité locale des hormones thyroïdiennes. Cette activité contribue à l’homéostasie endocrine et façonne les programmes transcriptionnels contrôlés par les récepteurs des hormones thyroïdiennes, reliant la fonction de DIO1 au taux métabolique, au métabolisme des lipides et des glucides, ainsi qu’à des processus cellulaires sensibles à l’état rédox. L’expression de DIO1 est particulièrement marquée dans le foie et le rein et est modulée par l’état nutritionnel et des signaux hormonaux qui influencent la dynamique de la signalisation des hormones thyroïdiennes. Une activité déiodinase dérégulée est associée à des profils d’hormones thyroïdiennes altérés observés dans les troubles thyroïdiens et les perturbations métaboliques systémiques, faisant de DIO1 une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies dépendantes des hormones.
DIO1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DIO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DIO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DIO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DIO1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.