Plásmido CRISPR de Activación (h) DIEXF: sc-411950-ACT

El DIEXF humano codifica un factor conservado de procesamiento de ARN implicado en la biogénesis de ribosomas y en el metabolismo del ARN, con funciones descritas en la maduración del pre-ARNr y en la actividad nucleolar que sostienen la síntesis de proteínas y la proliferación celular. La actividad de DIEXF se integra en programas fundamentales de expresión génica al influir en la producción y el control de calidad de las subunidades ribosómicas, vinculándola con el crecimiento celular, la adaptación al estrés y el mantenimiento del genoma. La regulación alterada de componentes de la biogénesis ribosomal se observa con frecuencia en estados proliferativos y relacionados con el estrés, lo que hace de DIEXF un nodo útil para estudiar vías que conectan la homeostasis nucleolar con el control del ciclo celular y la viabilidad. Por ello, en investigación biomédica, DIEXF es relevante para analizar cómo las perturbaciones del procesamiento de ARN y de la capacidad de traducción remodelan los fenotipos celulares.

DIEXF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DIEXF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DIEXF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DIEXF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DIEXF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DIEXF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DIEXF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DIEXF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DIEXF en células tumorales con expresión de DIEXF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.