Plasmide CRISPR d'Activation (h) DGLUCY: sc-413322-ACT

C14orf159 code DGLUCY, une protéine mitochondriale impliquée dans l’expression des gènes mitochondriaux et l’homéostasie de la chaîne respiratoire. Des études fonctionnelles récentes associent DGLUCY à la régulation de l’efficacité de la phosphorylation oxydative, à des processus liés au ribosome mitochondrial et aux réponses cellulaires au stress métabolique. Une activité altérée de DGLUCY a été évoquée dans le contexte de phénotypes de dysfonction mitochondriale, où des variations de la capacité bioénergétique peuvent influencer l’équilibre rédox et la sensibilité au stress. En conséquence, DGLUCY suscite un intérêt pour les recherches mécanistiques sur le métabolisme mitochondrial, les voies de contrôle qualité et des états pertinents pour les maladies caractérisés par une altération de la fonction mitochondriale.

DGLUCY Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C14orf159 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DGLUCY Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C14orf159 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C14orf159, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DGLUCY. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C14orf159 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DGLUCY au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DGLUCY dans les cellules tumorales présentant une expression de C14orf159 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.