Plasmide Double Nickase (m) DFNA5: sc-424934-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DFNA5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DFNA5 Double Nickase (m) et le plasmide DFNA5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dfna5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DFNA5 Antibody (G-9): sc-393162
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DFNA5 | sc-424934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) DFNA5 | sc-424934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Dfna5* code DFNA5, également connu sous le nom de gasdermine E (GSDME), un effecteur formateur de pores pouvant être activé par protéolyse pour induire une perméabilisation inflammatoire des membranes et une mort cellulaire lytique. Après clivage par la caspase-3, le fragment N-terminal s’insère dans les membranes et favorise des caractéristiques de nécrose secondaire/de pyroptose, reliant ainsi la signalisation apoptotique à des issues pro-inflammatoires. L’activité de DFNA5 s’articule avec l’apoptose intrinsèque, les réponses au stress mitochondrial et la signalisation de l’immunité innée qui façonnent l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la mort cellulaire médiée par les gasdermines a été associée à des pathologies inflammatoires et à des décisions de destin cellulaire pertinentes en cancérologie et en neurobiologie, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles murins.
DFNA5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dfna5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dfna5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dfna5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dfna5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.