Plásmido CRISPR de Activación (r) Dexras2: sc-437366-ACT

Dexras2 es una pequeña GTPasa relacionada con Ras, enriquecida en el sistema nervioso, que funciona como transductor de señales al vincular entradas dependientes de receptores y de calcio con vías posteriores de MAPK y de nucleótidos cíclicos. En neuronas de rata, se ha implicado en la modulación de la plasticidad sináptica y de la señalización circadiana, integrando señales derivadas de la actividad de GPCR y de la señalización relacionada con el óxido nítrico para moldear respuestas transcripcionales y electrofisiológicas. Los procesos asociados a Dexras2 incluyen la regulación del ciclo de la GTPasa, las interacciones proteína–proteína en compartimentos sinápticos y programas de expresión génica dependientes de la actividad. La desregulación de las redes de señalización de la familia Ras y de las vías de plasticidad neuronal en las que participa Dexras2 es relevante para estudios mecanísticos de fenotipos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos, sin implicar resultados clínicos.

Dexras2 El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dexras2 El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dexras2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dexras2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dexras2 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.